白酒酒糟发酵过程中微生物的接种方法

辽宁白酒瑰花香酒酒糟发酵过程中微生物的接种方法
1.接种前的准备工作
．接种室应经常保持无菌状态，定期用5％的煤皂酚或75％的酒精溶液擦拭桌面、墙壁、地面，或用乳酸、甲醛熏蒸，定期做无菌检查
．接种前，将要接种的全部物品移人无菌室的缓冲间内，用75％的酒精棉球擦拭干净，并在要接种的试管、平皿、三角瓶上贴好标签（斜面试管的标签贴在斜面的正上方，距管口2、3。 m处，平皿的标签贴在皿盖的侧面），在标签上注明菌种名称、接种日期，有的还要注明培养基的名称。
．接菌完毕，清理物品，在缓冲间脱去工作服、鞋、帽等，将物品移出，打开紫外灯进行20、30。灭菌。工作服、鞋、帽为无菌室专用，要经常换洗和消毒灭菌。
2·接种的操作方法
(1)斜面接种法斜面接种是从已保存菌种的斜面上挑取少量菌种移接到一个新鲜斜面培养基上的一种接种方法，其操作程序如下。
1点燃酒精灯，用75％的酒精棉球擦手。
2在左手的中指、无名指间分别夹住原菌种试管和待转接斜面试管（斜面朝上）。
3右手拿接种针或环，在火焰上将针、环等金属丝部分烧红灭菌，然后将其余要伸人试管部分的针柄也反复通过火焰灭菌。然后用握有接种针的右手中指、无名指拔出试管上的棉塞，操作应在火焰区域进行。
4将接种环水平通过火焰并插人原菌试管内，先在管壁上或未长菌体的培养基表面冷却，然后用接种环轻轻蘸取少量菌苔后，将接种环自原菌种管抽出，抽出时勿碰管壁，也勿通过火焰。
5在火焰旁将蘸有菌苔的接种环迅速伸人另一个待接斜面试管中，自斜面培养基底部向上划线，使菌体黏附在培养基的斜面上。划线时环要放平，勿用力，否则会将培养基表面划破。
6接种完毕，将接种环由试管内抽出，同时将试管口在火焰上灼烧一下，塞上棉塞。注意不要用试管口去迎棉塞，以免试管口在移动时，杂菌侵人造成污染。
7接种环在放回原处前应在火焰上彻底灭菌。放下接种环后，再用右手将棉塞进一步塞牢，避免脱落。最后将已接种好的斜面试管放在试管架上。
根据微生物不同和实验目的不同，接种的方法有许多，如下所示。
8细菌斜面接种法
a.点接把菌种点接在斜面中部，利于在一定时间内暂时保存菌种。
b.中央划线在斜面中部自下而上划一条直线，比较细菌的生长速度时采用此法。
c.稀波状蜿蜒划线法对于易扩散的细菌常用此法。
d.密波状蜿蜒划线法此法能充分利用斜面，以获得大量的菌体细胞，细菌接种时常用此法。
e,分段划线将斜面分成上下3、4段，在第2、3段划线接种前，先灼烧接种环进行灭菌，待冷却后蘸取前段接种处，再行划线，以分得单个菌落。
f.纵向划线此法便于快速划线接种。
O放线菌的斜面接种方法同细菌，多用密波状蜿蜒划线法接种，以便观察气生菌丝和孢子的颜色。
．酵母菌的斜面接种常用中央划线法接种，用来观察菌种的形态和培养特征。
O霉菌的斜面接种属扩散型生长、绒毛状气生菌丝。常用点接法，即点种在斜面中部偏下方处。
对部分真菌，如灵芝等担子菌类，常用挖块接种法，挖去菌丝体连同少量琼脂培养基，再移接到斜面培养基上。
    （2）液体接种法液体接种技术是用移液管、滴管或接种环等接种工具，将菌液移接到液体三角瓶、试管培养基中的一种接种方法。此法用于观察细菌、酵母菌的生长特征、生化反应特性及发酵生产中菌种的扩大培养。
    1由斜面培养基接人液体培养基操作方法基本与斜面转斜面接种相同，但在接种时要注意略使试管口向上，以免使液体培养基流出。接人菌体后，要将接种环与管壁轻轻研磨，将菌体擦下，接种后塞好棉塞，将试管在手掌中轻轻敲打，使菌体充分分散。
    2由液体培养基接种到液体培养基原菌种如为液体时，除用接种环外，还可以根据具体情况采用下列几种方法：用无菌滴管或移液管吸取菌液接种；直接把液体培养液摇匀后倒人液体培养基中；利用无菌空气被压后，把液体培养液注人另一个容器的液体培养基中，如啤酒酵母扩培时，从汉森罐到扩大罐就是采用此法；利用负压将液体培养液吸收到液体培养基中，如在抗生素生产中，从种子瓶接种到种子罐时就是采用此法。
    （3）穿刺接种法穿刺接种法用于接种试管深层琼脂培养基（柱状），经穿刺接种后的菌种常作为保存菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，可作为鉴定细菌特征的方法之一。穿刺接种只适用于细菌和酵母菌的接种培养，其方法是用笔直的接种针，从原菌种上挑取少量菌苔，再从柱状培养基中心自上而下刺人（试管口朝下），直到接近管底（勿穿到管底），然后，沿原穿刺途径慢慢抽出接种针。
    4平板接种法平板接种法是指在平板培养基上点接、划线或涂布接种。平板接种前，需要先将已灭菌的琼脂培养基放在水浴锅中充分加热熔化，待冷却到50℃左右后（手握三角瓶不觉得太烫为宜），用无菌操作法倒平板。若熔化的琼脂培养基的温度太高时，会产生较多的冷凝水，影响观察。待培养基冷却后即可进行接种。
    1点接用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌苔，点接到平板的不同位置上，培养后观察巨大菌落形态（细菌、酵母菌）；对于霉菌巨大菌落的观察，通常先在其斜面内侧倒人少量无菌水，用接种环将孢子挑起，制成菌悬液，用接种环点接到平板培养基上，培养后观察巨大菌落的特征。
    2划线接种划线接种是一种使被接菌种达到菌落纯的方法，其基本原理是在固体培养基表面将含菌培养物作规则划线，含菌样品经多次划线逐渐被稀释，最后在接种针划过的线上得到一个个被分离的、单独存在的细胞，经过培养后形成彼此独立的、由单个细胞发育的菌落。最常用的划线接种方式：首先将平板分成。、 b、。三个区域，用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌苔，在。区划折线，通过第一次划的线使接种针上带上菌种，再在 b区划线，划线路线不再和第一次划过的线接触；同样，将接种针在火焰上杀灭其上残余的菌体，然后使接种针和第二次划的线交叉，并过第二次划的线使接种针上带上菌种，在 c区划线，划线路线不再和前两次划过的线接触。这种操作方式不断使接种针上的被接菌种越来越少，最终达到菌落纯的目的。
    3涂布接种涂布接种也是一种分离纯化菌种的方法，首先将被分离纯化的含菌培养物制成稀释菌悬液，用无菌移液管吸取0·！。！“于固体培养基平板中，用涂布器将样品在琼脂培养基表面均匀涂布，使样品中的菌体在培养基上经培养后能形成单个菌落。